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上海金鵬分析儀器有限公司

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進階操作:利用凝膠成像分析系統進行定量分析

2025
04-11

07:14:05

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26
來源:上海金鵬分析儀器有限公司
在科研工作中,凝膠成像分析系統不僅用于定性觀察核酸、蛋白質等生物分子在凝膠上的條帶分布,更可通過一系列進階操作實現定量分析,為深入研究生物分子的表達量、含量變化等提供精準數據支持。
標準曲線繪制
定量分析的基礎是構建標準曲線。選擇已知濃度的標準樣品,如不同濃度梯度的 DNA 分子量標準或蛋白質標準品。將這些標準樣品依次進行凝膠電泳,與待測樣品在相同條件下運行。電泳結束后,利用凝膠成像分析系統對標準樣品條帶進行成像。使用系統自帶的分析軟件,測量標準樣品條帶的灰度值或峰面積等參數。以標準樣品濃度為橫坐標,對應的測量參數為縱坐標,繪制標準曲線。繪制過程中,要確保標準樣品濃度梯度合理,一般設置 5 - 7 個不同濃度點,且涵蓋待測樣品可能的濃度范圍,這樣繪制出的標準曲線具有良好的線性關系與準確性。
待測樣品定量
完成標準曲線繪制后,對待測樣品進行凝膠電泳與成像。使用分析軟件測量待測樣品條帶的相應參數,如灰度值。將測量值代入標準曲線方程,即可計算出待測樣品的濃度。例如,在研究某一基因在不同組織中的表達量差異時,提取不同組織的 RNA,反轉錄為 cDNA 后進行 PCR 擴增,擴增產物經凝膠電泳分離,利用凝膠成像分析系統結合標準曲線,準確測定不同組織中該基因的相對表達量。
數據驗證與誤差分析
為保證定量結果的可靠性,需進行數據驗證與誤差分析。對同一樣品進行多次平行測量,計算測量結果的平均值與標準差,評估數據的重復性。同時,設置陰性對照與陽性對照,陰性對照應無條帶或條帶信號極弱,陽性對照條帶信號應清晰且符合預期,以此驗證實驗體系的有效性。此外,分析實驗過程中可能引入誤差的因素,如樣品制備過程中的損失、凝膠電泳條件的微小差異等,采取相應措施盡量減小誤差,提高定量分析的準確性。
高級數據分析功能應用
部分凝膠成像分析系統具備更高級的數據分析功能,如多泳道對比分析、條帶自動匹配等。利用多泳道對比功能,可同時對多個樣品的條帶進行分析,直觀比較不同樣品中目標生物分子的含量差異。條帶自動匹配功能則能在復雜凝膠圖像中準確識別相同條帶,提高分析效率與準確性,尤其適用于大規模樣品分析實驗。

通過掌握利用凝膠成像分析系統進行定量分析的進階操作,科研人員能夠從凝膠圖像中挖掘出更豐富、準確的信息,為生命科學研究中的分子機制探索、疾病診斷標志物篩選等工作提供有力的數據支撐。
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